NtSKP1基因的反義載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因煙草的產(chǎn)生

根據(jù)枯斑三生煙SKP1基因(NtSKP1)的序列,設(shè)計一對分別含有特定酶切位點的特異引物,以重組質(zhì)粒pMD18-SKP1為模板,擴增目的基因(約473 bp)片段.將反向目的片段插入中間載體pHANNIBAL的內(nèi)含子右側(cè),再經(jīng)NotⅠ酶切回收約3 443 bp的目的片段,插入到雙元載體質(zhì)粒pART27中,成功構(gòu)建了含NtSKP1基因片段反向序列的植物表達載體pART27-skp1a,其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物能減弱目的基因的表達.將pART27-skp1a 質(zhì)粒導(dǎo)人根癌農(nóng)桿菌LBA4404中并轉(zhuǎn)化煙草葉片細胞,經(jīng)選擇分化培養(yǎng),獲得轉(zhuǎn)基因煙草.

作 者： 張付云 李偉 張瑛 孫秋穎 李研 杜昱光   作者單位： 張付云,李偉,張瑛,孫秋穎,李研(大連水產(chǎn)學(xué)院,大連,116023)

杜昱光(中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所,遼寧省碳水化合物研究重點實驗室,大連,116023) 

刊 名： 生物技術(shù)通報  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY BULLETIN  年，卷(期)： 2010 ""(4)  分類號：   關(guān)鍵詞： NtSKP1基因   反義表達載體的構(gòu)建   轉(zhuǎn)基因煙草   NtSKP1 gene   Construction of antisense expression vector   Transgenic tobacco  

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