牛分支桿菌MPT83基因的表達及重組蛋白的純化

從牛分支桿菌培養(yǎng)物中抽提總DNA,擴增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T SimpleVector,將測序正確的目的基因插入表達載體pET-32a(+)中,轉化BL21(DE3)宿主菌,IPTG誘導表達,用親和層析方法對表達蛋白進行了純化.經(jīng)測序,構建的克隆質粒pMD-MPT83與GenBank中的序列一致;構建的表達質粒pET-MPT83經(jīng)PCR和BamH Ⅰ+HindⅢ雙酶切鑒定構建正確;經(jīng)SDS-PAGE分析,在約42 ku處出現(xiàn)新的蛋白條帶,4 h后表達量即達到高峰;Westernblotting分析表明,融合蛋白能夠被牛分支桿菌陽性血清所識別;純化的表達蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳,出現(xiàn)清晰的單一條帶.表明MPT83基因原核表達載體構建成功.

作 者： 魯俊鵬 羅滿林 宋延華 鄒濰力 LU Jun-peng LUO Man-lin SONG Yan-hua ZOU Wei-li   作者單位： 魯俊鵬,羅滿林,鄒濰力,LU Jun-peng,LUO Man-lin,ZOU Wei-li(華南農業(yè)大學,獸醫(yī)學院,廣東,廣州,510642)

宋延華,SONG Yan-hua(廣東溫氏食品集團有限公司,廣東,新興,527439) 

刊 名： 中國獸醫(yī)科學  ISTIC PKU 英文刊名： VETERINARY SCIENCE IN CHINA  年，卷(期)： 2006 36(5)  分類號： S852.618 Q786  關鍵詞： 牛分支桿菌   MPT83基因   克隆   原核表達   蛋白純化  

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