抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單鏈抗體的表達(dá)、純化及活性測(cè)定

根據(jù)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體和轉(zhuǎn)鐵蛋白特異性結(jié)合的性質(zhì),利用親和純化的方法從胎盤(pán)中提取轉(zhuǎn)鐵蛋白受體.以轉(zhuǎn)鐵蛋白受體為抗原包被免疫管,從全合成人源噬菌體單鏈抗體庫(kù)中篩選其抗體.對(duì)篩選到的抗體進(jìn)行特異性鑒定后,將抗體基因插入表達(dá)載體pET22b(+),轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)后獲得可溶性表達(dá).HeLa細(xì)胞的免疫組化結(jié)果顯示,表達(dá)的抗體可以與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合.表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA金屬螯和層析柱純化、脫咪唑后,從尾靜脈注射小鼠.1h后,去除血液及毛細(xì)血管的干擾,在腦實(shí)質(zhì)中檢測(cè)到了抗體的存在,說(shuō)明該抗體可以通過(guò)血腦屏障.

作 者： 趙莉霞 顏冰 許龍 蔣世衛(wèi) 張瑩瑩 楊志新 周曉巍 黃培堂 ZHAO Li-Xia YAN Bing XU Long JIANG Shi-Wei ZHANG Ying-Ying YANG Zhi-Xin ZHOU Xiao-Wei HUANG Pei-Tang   作者單位： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體   單鏈抗體   表達(dá)   純化   血腦屏障  

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