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IL15/PAP融合蛋白基因克隆及其原核與植物表達載體的構(gòu)建
將IL15和PAP基因通過一甘氨酸接頭(Gly4Ser)3連接在一起,構(gòu)建原核和植物表達載體,以期表達具有導向殺傷活性的融合蛋白.在引物設(shè)計中,通過引物在IL15基因下游引入(Gly4Ser)3的編碼序列和Bam HI位點,然后采取分步克隆及PCR、酶切、連接等一系列分子克隆方法,將IL15和PAP基因融合在一起,構(gòu)建融合蛋白的原核與植物表達載體.經(jīng)PCR和Nco Ⅰ/SalⅠ雙酶切鑒定及測序,證實原核表達載體pET32a-IL15/PAP及植物表達載體pB-I P中均插入了正確的融合基因序列.
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