羽衣甘藍S13-b位點受體激酶基因的克隆及激酶結(jié)構(gòu)域的原核表達

目的:分離羽衣甘藍S13-b位點受體激酶(SRK13-b)基因并進行序列及結(jié)構(gòu)域分析,構(gòu)建SRK13-b結(jié)構(gòu)域的原核表達載體并進行重組蛋白質(zhì)的原核表達和純化.方法:提取羽衣甘藍S13-bS13-b自交不親和系花期柱頭的RNA,用RTPCR法分離SRK13-b基因;將編碼SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域的序列插入大腸桿菌表達載體pET-14b中,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET-SRK13-bCT,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株,經(jīng)0.1 mmol/L IPTG誘導,用Ni-NTA親和層析柱對SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域蛋白進行純化.結(jié)果:分離獲得羽衣甘藍SRK13-b基因的長度為2571 bp,編碼856個氨基酸,GenBank收錄號為EU180597;對SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域蛋白進行誘導表達及純化,SDS-PAGE顯示相對分子質(zhì)量約43×103的蛋白質(zhì)特異表達,對表達產(chǎn)物進行分離純化,獲得了SRK13-b激酶結(jié)構(gòu)域的融合蛋白.結(jié)論:羽衣甘藍SRK13-b基因的克隆及激酶結(jié)構(gòu)域的原核表達,為研究SRK的功能及自交不親和性奠定了基礎(chǔ).

作 者： 藍興國 楊佳 王艷紅 李玉花 LAN Xing-Guo YANG Jia WANG Yan-Hong LI Yu-Hua   作者單位： 東北林業(yè)大學,生命科學學院,黑龍江,哈爾濱,150040  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 羽衣甘藍   自交不親和   S13-b位點受體激酶   原核表達   純化  

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