質(zhì)粒介導(dǎo)的RNAi抑制端粒酶活性

為了探討靶向人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)基因的小干擾RNA(siRNA)表達(dá)載體是否具有抑制HeLa細(xì)胞端粒酶活性的能力,人工合成2條64個(gè)核苷酸(nt)的片段,其中19nt與hTERT基因1789-1807位堿基同源,將其退火、連接到質(zhì)粒pSUPER中,構(gòu)建pSUP-hTE.在pSUP-hTE基礎(chǔ)上,把該質(zhì)粒的啟動(dòng)子和64nt插入片段酶切、克隆到質(zhì)粒pEGFP-C1中生成pEGFP- hTE,從而獲得新霉素抗性篩選質(zhì)粒.將pEGFP- hTE用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,G418篩選后獲得抗性克隆并將其收獲、傳代,用不同方法檢測(cè)hTERT的mRNA和蛋白表達(dá)水平、HeLa細(xì)胞的端粒酶活性以及細(xì)胞的增殖能力.結(jié)果顯示,pEGFP-hTE轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞與對(duì)照組比較,hTERT的mRNA水平下降及蛋白表達(dá)減少、細(xì)胞端粒酶活性降低38%,但細(xì)胞增殖能力沒有明顯改變.以上結(jié)果表明, pEGFP-hTE能通過RNA干擾(RNAi)途徑特異性抑制HeLa細(xì)胞hTERT基因的表達(dá),從而有效抑制細(xì)胞端粒酶活性,這可能將為腫瘤生物治療提供一條新的途徑.

作 者： 李燕 李明遠(yuǎn) 彭穎 蔣中華 李婉宜 李虹 Li Yan Li Mingyuan Peng Ying Jiang Zhonghua Li Wanyi Li Hong   作者單位： 李燕,李明遠(yuǎn),蔣中華,李婉宜,李虹,Li Yan,Li Mingyuan,Jiang Zhonghua,Li Wanyi,Li Hong(四川大學(xué),華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院,病原生物學(xué)教研室,成都,610041)

彭穎,Peng Ying(四川維奧制藥有限公司,成都,610041) 

刊 名： 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF BIOMEDICAL ENGINEERING  年，卷(期)： 2006 23(3)  分類號(hào)： Q1  關(guān)鍵詞： pSUPER   RNA干擾   人端粒酶區(qū)轉(zhuǎn)錄酶   抑制端粒酶活性  

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