慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾抑SUPC12細(xì)胞MyD88基因的表達(dá)

目的 研究慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾對(duì)PC12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率和對(duì)MyD88基因的抑制效率.方法 構(gòu)建針對(duì)大鼠MyD88基因3個(gè)靶點(diǎn)的ShRNA慢病毒載體,PC12細(xì)胞按照不同的轉(zhuǎn)染條件分為正常組(DMEM完全培養(yǎng)液)、DMEM加入polybrene組、EN.iS(Enhance infection solution)組、EN.iS加入polybrene組.熒光顯微鏡下觀察不同組的轉(zhuǎn)染效率,采用Real-time PCR和Western blot檢測(cè)不同的靶點(diǎn)對(duì)MyD88的不同沉默效率.結(jié)果 病毒滴度為1×108 TU/ml,MOI為100時(shí),PC12細(xì)胞在EN.iS組的轉(zhuǎn)染效率最高,轉(zhuǎn)染試劑polybrene對(duì)轉(zhuǎn)染效率無明顯影響,沉默效率最高的靶點(diǎn)是5'-CATAC GCAACCAGCAGAAA-3''.結(jié)論 慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾是一種高效的基因沉默手段,可以對(duì)PC12細(xì)胞中MyD88的功能進(jìn)行長(zhǎng)期的研究.

作 者： 崔萬鵬 劉曉湘 方秀斌 CUI Wan-peng LIU Xiao-xiang FANG Xiu-bin   作者單位： 中國醫(yī)科大學(xué),基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)教研室,遼寧,沈陽,110001  刊 名： 解剖科學(xué)進(jìn)展  ISTIC 英文刊名： PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2010 16(2)  分類號(hào)： Q189  關(guān)鍵詞： PC12細(xì)胞   慢病毒   RNA干擾   髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88  

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