靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表達質粒的構建與篩選

目的 構建靶向β-連環(huán)蛋白(β-catenin)基因的shRNA的真核表達質粒,并篩選出沉默β-catenin基因效果最明顯的shRNA表達質粒.方法 設計3對針對β-catenin 基因不同位點的shRNA片段,構建攜帶此shRNA片段的真核表達質粒(shRNA1～3)并行測序分析,電穿孔轉染神經干細胞(neural stem cells NSCs),測定轉染率,并分別采用RT-PCR及Western 印跡檢測β-catenin mRNA和蛋白表達情況,免疫組化方法檢測shRNA對神經干細胞分化的影響.結果 構建靶向β-catenin基因的shRNA真核表達重組質粒shRNA1,2,3.經篩選,NSCs轉染shRNA3后,β-catenin RNA水平和蛋白水平均明顯低于陰性對照組和空白對照組(0.08±0.00 vs 0.75±0.01,0.74±0.02;0.12±0.10,vs 0.56±0.02,0.65±0.01,P均＜0.01;與空白組和陰性對照組相比,shRNA3組NSCs分化為GFAP陽性細胞的百分率明顯增加,分化為NSE陽性細胞的百分率明顯減少(P＜0.05).結論 β-catenin RNA3對神經干細胞的β-catenin表達具有明顯抑制作用,可影響細胞的分化.為研究wnt/β-catenin信號途徑在NSCs生長分化中的作用奠定基礎.

作 者： 張曉英 楊于嘉 諶崇峰 姚躍 王慶紅 ZHANG Xiaoying YANH Yujia CHEN Chongfeng Yao Yue WANG Qinghong   作者單位： 張曉英,ZHANG Xiaoying(中南大學湘雅醫(yī)院兒科,長沙市,410008;新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院兒科,烏魯木齊市,830054)

楊于嘉,諶崇峰,姚躍,王慶紅,YANH Yujia,CHEN Chongfeng,Yao Yue,WANG Qinghong(中南大學湘雅醫(yī)院兒科,長沙市,410008) 

刊 名： 醫(yī)學分子生物學雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2010 7(2)  分類號： Q782  關鍵詞： β-連環(huán)蛋白   短發(fā)夾狀RNA   電穿孔   神經干細胞   β-catenin   short hairpin RNA   electroporation   neural stem cells  

【靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表達質粒的構建與篩選】相關文章：

雞CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表達質粒的構建04-26

大鼠CD40基因RNA干擾真核表達載體的構建及鑒定04-26

大腸癌相關基因PGDH原核表達質粒的構建及表達04-26

大鼠對氧磷酶1真核表達載體的構建及在體外的表達04-27

介導大鼠結締組織生長因子基因沉默的慢病毒載體轉移質粒的構建及鑒定04-27

人類GAD67基因擴增及pEGFP-C2-GAD67真核表達載體的構建04-26

維甲酸受體β基因RNAi表達質粒的構建及其對A549細胞增殖和分化的影響04-27

人類α-actin 啟動子真核表達載體的構建及應用04-26

真核表達質粒PcDNA3.1(+)-帶有Vasostatin自身信號肽的Calreticulin(120～180 aa)的構建及其在COS-7細胞中的表達04-26

質粒介導shRNA對心肌細胞kir2.1蛋白表達和搏動頻率的影響04-26