一種改良的啟動子序列克隆的染色體步查法

利用染色體步行法,從已知DNA序列克隆側(cè)翼未知序列是非常有效的方法之一,但由于所選用的特定限制性內(nèi)切酶對目標(biāo)基因組不能酶解成合適大小的片段,因而受PCR擴(kuò)增能力的局限,往往擴(kuò)增不出有效產(chǎn)物.針對這一點(diǎn),這里我們介紹一種簡單有效的改良方法,它包括以下步驟:首先用不同的限制性內(nèi)切酶(包括平末端和粘性末端)酶解目標(biāo)基因組DNA,接著,選擇能將基因組酶切成彌散、分布均勻的限制性內(nèi)切酶,如Dra Ⅰ和Hind Ⅲ,合成相對應(yīng)的接頭;然后,選擇彌散的、分布均勻的限制性內(nèi)切酶的酶解產(chǎn)物,構(gòu)建成含相應(yīng)接頭的基因組DNA文庫,用作PCR的模板;最后,用接頭引物和特異引物,通過巢式PCR擴(kuò)增目的片段,獲得了理想的擴(kuò)增效果.采用改進(jìn)后的染色體步查法,有效地從較復(fù)雜的棉花核DNA中克隆出6個(gè)棉花啟動子序列.

作 者： 吳藹民 劉進(jìn)元 WU Ai-Min LIU Jin-Yuan   作者單位： 清華大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)系分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,北京,100084  刊 名： 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q7  關(guān)鍵詞： 連接介導(dǎo)的步查法   限制性內(nèi)切酶   棉花   啟動子序列   方法改良  

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