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融合酶表達(dá)載體的構(gòu)建及出現(xiàn)問(wèn)題的初探
目的:將限制性內(nèi)切酶Fok Ⅰ催化區(qū)域基因(631bp)和PI-Sce Ⅰ識(shí)別區(qū)域的基凼(546bp)連接到一起,克隆入載體質(zhì)粒pET28a-~+中,為表達(dá)新的限制性內(nèi)切酶融合酶做準(zhǔn)備.方法:分別以啤酒酵母和海床黃桿菌作模板,PCR擴(kuò)增PI-Sce Ⅰ和FokⅠ基因片段,再將它們克隆人載體質(zhì)粒pET28a~+,然后對(duì)整合質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切檢測(cè).結(jié)果:整合過(guò)程中,無(wú)論是PI-Sce Ⅰ還是Fok Ⅰ基因片段,都能單獨(dú)成功插入載體,但當(dāng)插入第二段基因片段時(shí),酶切結(jié)果顯示大約600bp的基因片段缺失了.結(jié)論:缺失可能因?yàn)閮啥芜B在一起的新基因在轉(zhuǎn)化過(guò)程中對(duì)宿主細(xì)胞有毒性,宿主細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行了剪切;也可能這兩段基因會(huì)形成某種高級(jí)結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致其不能很好的連接,產(chǎn)生缺失現(xiàn)象.
作 者： 崔寶寧 王芳 王艷萍 張治洲 作者單位： 泰達(dá)BIO-X系統(tǒng)生物技術(shù)研究中心,天津科技大學(xué),天津300457 刊 名： 生物技術(shù) PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 20(2) 分類(lèi)號(hào)： Q819 關(guān)鍵詞： 限制性內(nèi)切酶 PI-Sce Fok Ⅰ pET28a~+ 克隆 雙酶切 restriction endonuclease PI - Sce Ⅰ Fok Ⅰ pET28a~+ clone double digest【融合酶表達(dá)載體的構(gòu)建及出現(xiàn)問(wèn)題的初探】相關(guān)文章：
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