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Caspase-3反義寡核苷酸對γ-射線誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞中caspase-3表達與細(xì)胞凋亡的抑制作用
γ-射線可誘導(dǎo)人髓性白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞凋亡,但其機制尚未完全明了.為了觀察caspase-3在這種細(xì)胞凋亡模型中的作用,本研究設(shè)計合成針對caspase-3 mRNA 5'-非編碼區(qū)和編碼起始區(qū)的反義寡核苷酸(ASODNs),即ASODN-1和ASODN-2,以脂質(zhì)體介導(dǎo)法將不同濃度ASODN-1和ASODN-2轉(zhuǎn)染進入HL-60細(xì)胞,γ-射線照射.應(yīng)用TUNEL法觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及檢測凋亡細(xì)胞百分率,免疫細(xì)胞化學(xué)、Western blotting和RT-PCR技術(shù)分別檢測caspase-3及其mRNA在引入ASODNs前后的表達水平,并以錯配寡核苷酸(MODN)轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對照組.TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn),當(dāng)ASODN-1和ASODN-2轉(zhuǎn)染終濃度≥3μmol/L時,γ-射線誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡率降低,與對照組相比均有顯著性差異(P＜0.01).免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,與兩對照組相比,轉(zhuǎn)染ASODNs后各組caspase-3陽性細(xì)胞率顯著下降,陽性細(xì)胞染色減弱,其平均灰度值顯著增高(P＜0.01).Western blotting檢測顯示,轉(zhuǎn)染ASODNs組細(xì)胞caspase-3蛋白酶原表達降低,其中ASODN-1組顯著低于ASODN-2組.RT-PCR結(jié)果顯示兩對照組細(xì)胞caspase-3 mRNA均有明顯表達,轉(zhuǎn)染ASODNs后caspase-3 mRNA表達豐度降低.另外,ASODN-1抑制細(xì)胞凋亡和caspase-3表達的作用顯著強于ASODN-2(分別為P＜0.05和P＜0.01).實驗結(jié)果表明,caspase-3 mRNA ASODNs能夠抑制γ-射線照射誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡,下調(diào)caspase-3蛋白和caspase-3 mRNA的表達水平,其抑制作用在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴性.
作 者： 張曉田 宋天保 李冬民 吳曉琳 ZHANG Xiao Tian SONG Tian Bao LI Dong Min WU Xiao Lin 作者單位： 張曉田,宋天保,ZHANG Xiao Tian,SONG Tian Bao(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點實驗室)李冬民,吳曉琳,LI Dong Min,WU Xiao Lin(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)系,西安,710061)
刊 名： 分子細(xì)胞生物學(xué)報 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF MOLECULAR CELL BIOLOGY 年，卷(期)： 2006 39(4) 分類號： Q2 關(guān)鍵詞： Caspase-3 反義寡核苷酸 HL-60細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 γ-射線輻照【Caspase-3反義寡核苷酸對γ-射線誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞中caspa】相關(guān)文章：
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