- 相關(guān)推薦
靶向Nrf2基因RNA干擾真核表達(dá)載體的構(gòu)建
目的:利用pSUPER載體構(gòu)建針對人核因子E2 p45相關(guān)因子2(Nrf2)基因的RNA干擾真核表達(dá)載體,為研究Nrf2基因在結(jié)腸癌化學(xué)預(yù)防中的作用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).方法:設(shè)計特異性針對Nrf2基因的寡核苷酸序列及相應(yīng)的對照序列,構(gòu)建重組載體pSUPER-Nrf2轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞.同時轉(zhuǎn)染pEGFP-N1質(zhì)粒,通過熒光顯微鏡觀察及流式細(xì)胞儀檢測綠色熒光監(jiān)測轉(zhuǎn)染效率,共轉(zhuǎn)染pEGFP-N1 48h后G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞.RT-PCR和Western blot檢測瞬時及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞Nrf2基因的表達(dá),觀察穩(wěn)定篩選出的細(xì)胞中UGT1A基因mRNA水平的表達(dá)變化.結(jié)果:成功構(gòu)建RNA干擾真核表達(dá)載體pSU-PER-Nrf2.轉(zhuǎn)染后24～96 h,熒光顯微鏡及FCM檢測顯示轉(zhuǎn)染效率為30%～75%.瞬時轉(zhuǎn)染pSUPER-Nff2-A2,pSUPER-Nrf2-B2重組質(zhì)粒Nrf2 mRNA的表達(dá)差異無顯著性(P＞0.05);瞬時轉(zhuǎn)染72 h及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后,pSUPER-Nrf2-A1,pSUPER-Nrf2-B1可顯著抑制Nrf2基因的表達(dá).RT-PCR檢測顯示,穩(wěn)定篩選出的細(xì)胞中UGT1A表達(dá)水平降低(P＜0.05).結(jié)論:成功構(gòu)建了Nrf2的RNA干擾表達(dá)載體,篩選并獲得低表達(dá)Nrf2基因的穩(wěn)定克隆,篩選出的細(xì)胞UGT1A表達(dá)水平明顯降低,表明Nrf2可能對UGT1A酶的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用.
作 者： 楊曉云 李延青 梁曉紅 郭玉婷 袁俊華 張燕 朱強(qiáng) YANG Xiao-yun LI Yan-qing LIANG Xiao-hong GUO Yu-ting YUAN Jun-hua ZHANG Yan ZHU Qiang 作者單位： 楊曉云,李延青,郭玉婷,袁俊華,張燕,朱強(qiáng),YANG Xiao-yun,LI Yan-qing,GUO Yu-ting,YUAN Jun-hua,ZHANG Yan,ZHU Qiang(山東大學(xué),齊魯醫(yī)院消化內(nèi)科,山東,濟(jì)南,250012)梁曉紅,LIANG Xiao-hong(山東大學(xué),免疫學(xué)研究所,山東,濟(jì)南,250012)
刊 名： 山東大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) 年，卷(期)： 2006 44(4) 分類號： Q786 關(guān)鍵詞： 基因,Nrf2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶 RNA干擾 結(jié)腸腫瘤【靶向Nrf2基因RNA干擾真核表達(dá)載體的構(gòu)建】相關(guān)文章：
大鼠CD40基因RNA干擾真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定04-26
載體介導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞DNA聚合酶β基因的靶向RNA干擾04-26
RS基因的植物表達(dá)載體和酵母表達(dá)載體構(gòu)建04-27
大鼠對氧磷酶1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在體外的表達(dá)04-27
人類α-actin 啟動子真核表達(dá)載體的構(gòu)建及應(yīng)用04-26
人類GAD67基因擴(kuò)增及pEGFP-C2-GAD67真核表達(dá)載體的構(gòu)建04-26
腺病毒載體介導(dǎo)的GFP基因在鴨胚成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及RNA干擾04-27