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林麝IL-2細(xì)胞因子的克隆、表達(dá)和純化
用林麝( Moschus berezovskii)外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)提取總RNA,RT-PCR擴(kuò)增IL-2(interleukin-2, IL-2),連接pMD18-T載體后轉(zhuǎn)化大腸桿菌,篩選陽(yáng)性克隆并測(cè)序.然后將IL-2成熟肽編碼序列連接到pGEX4T-1原核表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)、純化.結(jié)果表明林麝IL-2開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)468 bp,編碼155個(gè)氨基酸.序列分析表明,林麝IL-2及其受體結(jié)合域與水牛的高度保守,而在翻譯后修飾的預(yù)測(cè)活性位點(diǎn)上和水牛的有所不同.IPTG誘導(dǎo)林麝IL-2蛋白表達(dá),得到約41 kD的目標(biāo)帶;優(yōu)化表達(dá)后,林麝IL-2表達(dá)含量達(dá)到了總蛋白量的25%.經(jīng)GST親和柱分離純化,得到了約41 kD的單一目標(biāo)帶,這說(shuō)明林麝IL-2基因的原核表達(dá)成功.
作 者： 賴彬 徐柳 岳碧松 鄒方東 LAI Bin XU Liu YUE Bi-song ZOU Fang-dong 作者單位： 賴彬,岳碧松,鄒方東,LAI Bin,YUE Bi-song,ZOU Fang-dong(生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川大學(xué)生命科學(xué)院,成都,610064)徐柳,XU Liu(生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川大學(xué)生命科學(xué)院,成都,610064;西南交通大學(xué)生物工程學(xué)院)
刊 名： 四川動(dòng)物 ISTIC PKU 英文刊名： SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY 年，卷(期)： 2006 25(4) 分類號(hào)： Q95 關(guān)鍵詞： 林麝白介素-2 克隆 原核表達(dá)【林麝IL-2細(xì)胞因子的克隆、表達(dá)和純化】相關(guān)文章：
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