應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選干擾素β結(jié)合蛋白的研究

目的 應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選干擾素β(IFNβ)結(jié)合蛋白.方法 用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增IFNβ基因,連接酵母表達(dá)載體pGBKT7構(gòu)建誘餌質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞AH109,與含人肝細(xì)胞cDNA文庫質(zhì)粒的酵母細(xì)胞Y187進(jìn)行配合,在營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上進(jìn)行雙重篩選陽性克隆,提取酵母質(zhì)粒后轉(zhuǎn)化大腸埃希菌(DH5α)并經(jīng)氨芐西林抗性篩選,提取單克隆菌落質(zhì)粒,進(jìn)行酶切鑒定及序列測(cè)定,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析.結(jié)果 應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選出陽性克隆29個(gè),經(jīng)生物信息學(xué)分析,排除讀碼框架不正確者,最后得到19個(gè)克隆基因,編碼14種已知蛋白和一種未知功能蛋白.初步發(fā)現(xiàn)鐵蛋白與IFNβ具有結(jié)合作用.結(jié)論 應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選出多種與IFNβ具有結(jié)合作用的蛋白.

作 者： 鐘彥偉 成軍 郭風(fēng)勁 曲建慧 紀(jì)冬 程勇前 李曉東 郭江 戴久增 王琳 徐東平 ZHONG Yan-wei CHENG Jun GUO Feng-jin QU Jian-hui JI Dong CHENG Yong-qian LI Xiao-dong GUO Jiang DAI Jiu-zeng WANG Lin XU Dong-ping   作者單位： 鐘彥偉,曲建慧,紀(jì)冬,程勇前,李曉東,戴久增,王琳,徐東平,ZHONG Yan-wei,QU Jian-hui,JI Dong,CHENG Yong-qian,LI Xiao-dong,DAI Jiu-zeng,WANG Lin,XU Dong-ping(100039,北京,解放軍第三○二醫(yī)院傳染病研究所病毒性肝炎研究室)

成軍,郭江,CHENG Jun,GUO Jiang(北京地壇醫(yī)院傳染病研究所)

郭風(fēng)勁,GUO Feng-jin(重慶醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室) 

刊 名： 中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY  年，卷(期)： 2006 20(4)  分類號(hào)： Q5  關(guān)鍵詞： 酵母菌   雜交   干擾素β   結(jié)合蛋白  

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