GST-GnRH/TRS融合蛋白(包涵體)的分離、純化與復(fù)性研究

以人工合成的促性腺激素釋放激素(Gonadotropin releasing hormone,GnRH)/轉(zhuǎn)運(yùn)肽(TRS)基因與表達(dá)載體pGEX-6p-1相連的重組子(pGE-G)作為研究對(duì)象,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(ED3)plyS.本文對(duì)GST-GnRH/TRS/ BL21(DE3) plyS工程菌的GST-GnRH/TRS重組產(chǎn)物進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)和分離純化的研究,結(jié)果表明,該工程菌用LB培養(yǎng)基在30℃擴(kuò)增至OD590為0.6左右,加IPTG(終濃度為0.2 mmol/L)誘導(dǎo)3.5 h,此時(shí)GST-GnRH/TRS的表達(dá)量可占菌體總蛋白的33.3%.重組產(chǎn)物絕大多數(shù)以IBs形式存在于菌體中.工程菌經(jīng)溶菌酶破碎、高速離心,得IBs粗制品后,再用8 mL 1%(V/V)Triton X-100變性溶解IBs,離心取上清,進(jìn)行Glutathione Sepharose 4B柱一步法親和層析,得到了純度較高的GST-GnRH/TRS融合蛋白,為進(jìn)一步研究和實(shí)際應(yīng)用奠定基礎(chǔ).

作 者： 金元昌 陳春嵐 蘇曉艷 李會(huì)東 令玉林 李景鵬 JIN Yuan-chang CHEN Chun-lan SU Xiao-yan LI Hui-dong Ling Yu-Lin LI Jing-peng   作者單位： 金元昌,李會(huì)東,JIN Yuan-chang,LI Hui-dong(湖南科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,湖南湘潭,411201)

陳春嵐,CHEN Chun-lan(賀州學(xué)院,廣西賀州,542800)

蘇曉艷,SU Xiao-yan(湖西科技大學(xué)附屬醫(yī)院,湖南湘潭,411201)

令玉林,Ling Yu-Lin(湖南科技大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,湖南湘潭,411201)

李景鵬,LI Jing-peng(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,黑龍江哈爾濱,150030) 

刊 名： 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA  年，卷(期)： 2006 15(4)  分類號(hào)： Q785 S852.21  關(guān)鍵詞： GnRH   融合蛋白   分離純化與復(fù)性  

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