基于PCR的siRNA表達(dá)框的制備

目的改進(jìn)目前基于PCR的方法制備siRNA表達(dá)框,轉(zhuǎn)染細(xì)胞后產(chǎn)生高效的RNA干擾作用.方法從K562細(xì)胞中提取基因組DNA,以此為模板,PCR擴(kuò)增U6啟動(dòng)子序列并克隆至pMD18-T載體中,用載體上的引物進(jìn)行擴(kuò)增,所得產(chǎn)物即制成作為擴(kuò)增siRNA表達(dá)框的模板.選擇p53為靶基因,擴(kuò)增制備siRNA表達(dá)框,測(cè)序驗(yàn)證后,轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞48h后提取RNA進(jìn)行RT-PCR,檢測(cè)RNA干擾的效應(yīng).結(jié)果測(cè)序結(jié)果表明所克隆的U6啟動(dòng)子序列正確.細(xì)胞轉(zhuǎn)染表達(dá)框,在mRNA水平上,p53基因的表達(dá)明顯受到了抑制.結(jié)論本實(shí)驗(yàn)所制作的基于PCR的方法制備siRNA表達(dá)框可以很好地應(yīng)用于RNAi作用研究.

作 者： 郭秋野 馬文麗 張寶 吳清華 嚴(yán)律 鄭文嶺 GUO Qiu-ye MA Wen-li ZHANG Bao WU Qing-hua YAN Lü ZHENG Wen-ling   作者單位： 郭秋野,馬文麗,張寶,吳清華,嚴(yán)律,GUO Qiu-ye,MA Wen-li,ZHANG Bao,WU Qing-hua,YAN Lü(南方醫(yī)科大學(xué)基因工程研究所,廣東,廣州,510515)

鄭文嶺,ZHENG Wen-ling(華南基因中心,廣東,廣州,510830) 

刊 名： 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 26(4)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： RNAi   siRNA   U6啟動(dòng)子   PCR表達(dá)框架   SH-SYSY細(xì)胞  

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