人lrp-cDNA全長編碼區(qū)的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)

目的:擴(kuò)增人lrp-cDNA全長編碼區(qū)、并在大腸桿菌中表達(dá)和鑒定.方法:提取脂多糖刺激后HEK293細(xì)胞的總RNA,通過RT-PCR的方法擴(kuò)增出全長人lrp序列,將其克隆入原核表達(dá)載體pcTAT后轉(zhuǎn)化大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá),做SDS-PAGE分析;并用免疫印跡法鑒定6His-TAT-LRG融合蛋白表達(dá).結(jié)果:測序結(jié)果表明,獲得了全長人lrp-cDNA全長編碼區(qū),其序列與GenBank已經(jīng)公布的不完全一致;SDS-PAGE分析表明,6His-TAT-Lrp融合蛋白在大腸桿菌中成功表達(dá),表達(dá)量約占菌體總蛋白的17%;免疫印跡法鑒定顯示,該融合蛋白可與相應(yīng)抗血清產(chǎn)生陽性反應(yīng).結(jié)論:得到人lrp-cDNA全長編碼區(qū)序列,并成功表達(dá),為人lrp功能的深入研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 宋慶賀 柴玉波 陳蘇民 陳南春 黃勇 代忠明 SONG Qing-He CHAI Yu-Bo CHEN Su-Min CHEN Nan-Chun HUANG Yong DAI Zhong-Ming   作者單位： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室,陜西,西安,710033  刊 名： 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 27(5)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 脂多糖   應(yīng)答基因   逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)   基因表達(dá)  

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