顆粒溶素的表達(dá)純化及生物學(xué)活性分析

目的:采用原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)顆粒溶素(granulysin,GNLY)進(jìn)行體外表達(dá),純化及活性鑒定.方法:以體外培養(yǎng)的人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)為模板,RT-PCR擴(kuò)增編碼GNLY的cDNA片段,插入pMD-18-T 載體,測(cè)序正確后再亞克隆到質(zhì)粒pET28a(+) 中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)-GNLY,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3) plysS,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,包涵體經(jīng)變復(fù)性后用Ni親和層析純化,CFU法測(cè)定蛋白活性.結(jié)果:成功地將GNLY cDNA片段插入載體pET28a(+)中,構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)-GNLY.經(jīng)誘導(dǎo)在原核表達(dá)系統(tǒng)中以包涵體形式高效表達(dá)了相對(duì)分子質(zhì)量為9 000的融合蛋白,變復(fù)性純化后的GNLY蛋白經(jīng)CFU法檢測(cè),發(fā)現(xiàn)其具有細(xì)胞毒活性且細(xì)胞毒作用具有劑量依賴性.結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功地表達(dá)了具有生物學(xué)活性的GNLY,為研究其功能、作用機(jī)制及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).

作 者： 錢琤 陳孫孝 周曄 王燕 谷明莉 陳波 陳燕 鄧安梅 仲人前 QIAN Cheng CHEN Sun-xiao ZHOU Ye WANG Yan GU Ming-li CHEN Bo CHEN Yan DENG An-mei ZHONG Ren-qian   作者單位： 第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)征醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科,全軍臨床免疫中心,上海,200003  刊 名： 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 27(8)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 顆粒溶素   基因表達(dá)   生物學(xué)活性  

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