人HIF-1α基因重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定

目的 構(gòu)建人缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)基因的重組腺病毒載體,并觀察其對(duì)HepG2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況.方法 采用基因工程技術(shù),經(jīng)過亞克隆將人HIF-1α基因片段克隆至穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)同源重組后,經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,進(jìn)行重組腺病毒的包裝、擴(kuò)增.采用PCR方法對(duì)重組腺病毒進(jìn)行鑒定,利用穿梭質(zhì)粒中帶有綠色熒光蛋白GFP報(bào)告基因,進(jìn)行病毒滴度的測(cè)定和對(duì)HepG2細(xì)胞感染效率的監(jiān)測(cè).結(jié)果 酶切鑒定及PCR結(jié)果證明重組腺病毒載體成功,人HIF-1α重組腺病毒滴度達(dá)1.15×1010 pfu/ml,陰性對(duì)照腺病毒的滴度為8×1010 pfu/ml,并對(duì)HepG2細(xì)胞具有很強(qiáng)的感染力.結(jié)論 應(yīng)用細(xì)菌內(nèi)同源重組法成功構(gòu)建了含人HIF-1α基因的重組腺病毒載體.

作 者： 蔣春華 高鈺琪 黃慶愿 黃緘 賀偉峰 段小軍 JIANG Chun-hua GAO Yu-qi HUANG Qing-yuan HUANG Jian HE Wei-feng DUAN Xiao-jun   作者單位： 蔣春華,高鈺琪,黃慶愿,黃緘,JIANG Chun-hua,GAO Yu-qi,HUANG Qing-yuan,HUANG Jian(第三軍醫(yī)大學(xué),高原軍事醫(yī)學(xué)系病理生理學(xué)與高原生理學(xué)教研室,全軍高原醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶,400038)

賀偉峰,HE Wei-feng(第三軍醫(yī)大學(xué),西南醫(yī)院全軍燒傷研究所,創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶,400038)

段小軍,DUAN Xiao-jun(第三軍醫(yī)大學(xué),西南醫(yī)院骨關(guān)節(jié)中心,全軍矯形外科中心,重慶,400038) 

刊 名： 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE  年，卷(期)： 2006 28(20)  分類號(hào)： Q782 Q789  關(guān)鍵詞： 腺病毒   HIF-1α基因   同源重組  

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