重組幽門螺桿菌AhpC基因的克隆表達(dá)及其初步純化

目的克隆表達(dá)幽門螺桿菌(helicobacter pylori)AhpC基因,為篩選預(yù)防或治療幽門螺桿菌的疫苗保護(hù)性抗原奠定基礎(chǔ).方法用PCR方法從臨床分離株9806的染色體DNA中擴(kuò)增出AhpC基因片段,將目的基因插入表達(dá)載體pET-11c中,重組載體pET-AhpC經(jīng)DNA測序鑒定后,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá).采用陰離子交換層析純化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鑒定.結(jié)果 PCR擴(kuò)增的AhpC基因長度為597bp,經(jīng)酶切和測序分析,插入到載體的基因片段與GenBank公布的序列相似性達(dá)98%,SDS-PAGE顯示,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)目的蛋白占總蛋白的28.7%,經(jīng)純化后,蛋白純度達(dá)70%以上.Western blot檢測該蛋白與兔抗Hp的多克隆抗血清發(fā)生結(jié)合反應(yīng).結(jié)論成功構(gòu)建了AhpC表達(dá)載體pET-AhpC,并在大腸桿菌中高效表達(dá).

作 者： 張衛(wèi)軍 鄒全明 毛旭虎 羅萍 解慶華   作者單位： 第三軍醫(yī)大學(xué)臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)教研室暨重慶市生物制藥工程技術(shù)研究中心,重慶,400038  刊 名： 重慶醫(yī)學(xué)  ISTIC PKU 英文刊名： CHONGQING MEDICINE  年，卷(期)： 2006 35(11)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 幽門螺桿菌   AhpC基因   克隆  

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