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關(guān)于葉綠素提取實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)
摘 要： 作者對葉綠素提取實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了改進(jìn)。分別用洋槐、觀賞碧桃、菠菜和芹菜葉片作為實(shí)驗(yàn)材料，用丙酮、乙醇作為提取溶劑對葉綠素進(jìn)行提取并做含量測定。結(jié)果表明，四種材料中，洋槐葉片葉綠素含量最高。丙酮和乙醇對提取葉綠素含量影響差異不大，所以可以用乙醇代替丙酮提取葉綠素，既經(jīng)濟(jì)又無刺激性。
關(guān)鍵詞： 葉綠體色素提取實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)方法
引言
《葉綠素的提取》實(shí)驗(yàn)是高校生物及相關(guān)專業(yè)《植物生理學(xué)》系列實(shí)驗(yàn)的重要部分，是高中生物課程實(shí)驗(yàn)。在進(jìn)行葉綠素理化性質(zhì)和含量測定實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中，用丙酮作為提取溶劑，實(shí)驗(yàn)材料為市場購買菠菜和芹菜，但實(shí)驗(yàn)效果不佳。針對上述情況，筆者特對實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了改進(jìn)嘗試。實(shí)驗(yàn)選取洋槐、觀賞碧桃、菠菜和芹菜葉作為材料，用丙酮和乙醇作為提取溶劑。
1.材料和方法
1.1材料與試劑
1.1.1材料：銅仁學(xué)院校園內(nèi)新鮮洋槐葉、觀賞碧桃葉，菠菜、芹菜購自市場。
1.1.2試劑：無水乙醇、丙酮，均為國產(chǎn)分析純。
1.1.3儀器設(shè)備：T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)，AL204型電子天平。
1.2實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1方法：紫外分光光度計(jì)法[1]
1.2.2步驟：
葉綠素含量的測定：稱取新鮮葉片0.25g于研缽中，加入5mL提取溶劑、少許石英沙和無水CaCO，研磨成勻漿，3000r/min離心10min，上清液用80%提取溶劑定容至10mL。以空白溶液對照，分別在波長645nm和663nm處測定吸光度。
2.結(jié)果與分析
2.1以丙酮作為提取溶劑時葉綠素的含量
以丙酮作為提取溶劑時，葉綠素的含量差異比較大。從圖1可知，以丙酮作為提取溶劑時，洋槐葉的葉綠素a、葉綠素b和葉綠素a+b含量最高。
2.2以乙醇作為提取溶劑時葉綠素的含量
以乙醇作為提取溶劑時，葉綠素的含量差異比較大。從圖2可知，以乙醇作為提取溶劑時，洋槐葉的葉綠素a含量、葉綠素b含量和葉綠素a+b含量都是最高。
2.3不同提取材料和溶劑時葉綠素的含量
以不同提取材料和溶劑提取葉綠素，其含量差異比較大。從圖3可知，以丙酮和乙醇作為提取溶劑時，葉綠素a含量差異不大；以乙醇作為提取溶劑時，葉綠素b含量是洋槐葉最高；以丙酮和乙醇作為提取溶劑時，葉綠素a+b含量差異不大，且是洋槐葉含量最高。
3.結(jié)論
用丙酮作為提取溶劑時，洋槐葉的葉綠素含量最高；用乙醇作為提取溶劑時，也是洋槐葉的葉綠素含量最高；所以在選取的四種材料中，洋槐葉綠素含量最高，實(shí)驗(yàn)效果最好。用丙酮和乙醇提取葉綠素，其含量差異不大，所以用乙醇代替丙酮進(jìn)行葉綠素含量提取實(shí)驗(yàn)，更加經(jīng)濟(jì)、無刺激性。
參考文獻(xiàn)：
[1]張志良，瞿偉菁，李小方.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（第4版）[M].北京：高等教育出版社，2009：135-136.
基金項(xiàng)目：貴州省教育廳教改培育項(xiàng)目“基于創(chuàng)新能力培養(yǎng)的園林專業(yè)實(shí)踐課程新體系的構(gòu)建與實(shí)踐”[黔教高發(fā)〔2012〕426]；貴州省教育廳特色實(shí)驗(yàn)室建設(shè)項(xiàng)目“梵凈山特色動植物資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”[黔教合KY（2011）232]。
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