膜-胞漿蛋白提取方法

膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品組成 規(guī)格 試劑 A 試劑 B 試劑 C

蛋白酶抑制劑混合物

蛋白穩(wěn)定劑

BB-3111-1

50T 10ml 20ml 10ml 250μl 100ul

BB-3111-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 200ul

儲存條件：

蛋白酶抑制劑、蛋白穩(wěn)定劑-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：

一年。

產(chǎn)品簡介：

哺乳動物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu)，因而妨礙了膜蛋白的功能研究。

貝博膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒是一種基于化學(xué)而非去污劑方法的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供配套試劑，適用于從細(xì)胞和動物組織提取膜蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。

應(yīng)用實(shí)例：

1 4 4

圖片說明：用膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞樣本的SDA-PAGE的電泳考染照片和Western照片。圖1泳道中1、4分別為Marker、膜蛋白樣本。圖2為以上樣品的EGFR的WB結(jié)果照片。

使用方法：

A． 細(xì)胞蛋白提取

①

1. 取5-10×106個以上細(xì)胞，在4℃，500g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)

基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。 3. 細(xì)胞樣品中加入200μl冷的試劑 A，2ul蛋白酶抑制劑混合物，2ul蛋白穩(wěn)定劑，

高速渦旋振蕩15秒，置冰上10-15分鐘。

4. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，13000×g條件下離心5分鐘。

5. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，37℃水浴5-10分鐘，37℃下2000g

離心5分鐘，此時溶液分為兩層（對著光線看），下層約為20μl。

③

6. 收集上層，即為胞漿蛋白。

7. 用150-200μl冰冷的試劑B稀釋下層相，混勻后冰浴2min，37℃水浴5-10分鐘，

②

37℃下②2000g離心5分鐘，此時溶液分為兩層（對著光線看），下層相約為

20μl。

8. 按步驟7再次抽提下層相(此步驟可以選做)。

9. 用80-200μl冰冷的試劑C稀釋下層相，即得膜蛋白。

③④

10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。 B． 組織蛋白提取

1. 取適量組織樣本剪碎，加冷PBS，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體（或

用液氮研磨），冰上靜置5分鐘，小心將勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。 2. 在4℃，500g條件下離心2-3分鐘，棄上清。

3. 按照細(xì)胞蛋白的提取方法的第3步驟往下操作即可。 上述蛋白提取物請分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

參考文獻(xiàn)：

● 李素芬, 楊鷹. 不同濃度瘦素對人胚胎絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞膜胰島素受體磷酸化的抑制作用

第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報, 2010,32(23): 2530-2532.

● 何鴻保 孫浩等. 5-Aza-CdR對腎細(xì)胞癌Caki-1細(xì)胞生長及E-鈣黏蛋白基因表達(dá)的影響 江蘇大學(xué)學(xué)報, 2011年01期

● 余冬梅 陳明. 雷米普利通過干預(yù)瞬時感受器陽離子通道C3的表達(dá)對心肌纖維化的影響 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2011年01期

● 趙萍 賀英 等. 山羊支原體山羊肺炎亞種M1601株外膜蛋白的免疫原性

中國獸醫(yī)科學(xué), 2010 年12期

相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品

總蛋白提取試劑盒 核蛋白提取試劑盒

膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒 Bradford蛋白定量試劑盒 ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒 細(xì)胞蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品號 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121

產(chǎn)品

磷酸化蛋白富集試劑盒 膜蛋白提取試劑盒 活性蛋白提取試劑盒 BCA蛋白定量試劑盒 植物核蛋白提取試劑盒 細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品號 BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151

組織蛋白提取試劑盒 細(xì)菌蛋白提取試劑盒 酵母蛋白提取試劑盒 昆蟲蛋白提取試劑盒 磷酸化蛋白提取試劑盒

總蛋白提取試劑盒（2D電泳用） 植物蛋白提取盒（2D電泳用） 細(xì)菌膜蛋白提取盒（2D電泳用）

BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3181 BB-3183 BB-3187

植物總蛋白提取試劑盒 植物膜蛋白提取試劑盒 蛋白酶抑制劑混合物 真菌蛋白提取試劑盒 磷酸酶抑制劑混合物 細(xì)菌蛋白提取盒（2D電泳用） 酵母蛋白提取盒（2D電泳用） 線粒體蛋白提取盒（2D電泳用）

BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3127 BB-3311 BB-3182 BB-3185 BB-3191

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