膽固醇氧化酶法測(cè)定血清總膽固醇

膽固醇氧化酶法測(cè)定血清總膽固醇

【原理】

血清中總膽固醇(total cholesterol，TC)包括游離膽固醇(free cholesterol，F(xiàn)C)和膽固醇酯(cholesterol ester，CE)兩部分。血清中膽固醇酯可被膽固醇酯酶水解為游離膽固醇和游離脂肪酸(FFA)，膽固醇在膽固醇氧化酶的'氧化作用下生成△4-膽甾烯酮和過(guò)氧化氫，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在時(shí)，經(jīng)過(guò)氧化物酶催化，反應(yīng)生成苯醌亞胺非那腙的紅色醌類化合物，其顏色深淺與標(biāo)本中TC含量成正比。 【試劑】

1．膽固醇液體酶試劑組成(具體含量見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn))

GOOD's緩沖液(pH6.7) 膽固醇酯酶 膽固醇氧化酶 過(guò)氧化物酶 4-AAP 苯酚

50mmol/L ≥200U/L ≥100U/L ≥3 000U/L 0.3mmol/L 5mmol/L

2．膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精確稱取膽固醇200 mg，用異丙醇配成100 ml溶液，分裝后，4℃保存，臨用取出。也可用定值的參考血清作標(biāo)準(zhǔn)。 【操作步驟】 終點(diǎn)法檢測(cè)TC按下表依次加樣。

酶法測(cè)定TC操作步驟

項(xiàng)目 血清(μl) 標(biāo)準(zhǔn)液/定值血清(μl)

蒸餾水(μl) 酶試劑(μl)

測(cè)定管 50 － － 1.50

標(biāo)準(zhǔn)管 － 50 － 1.50

空白管 － － 50 1.50

混勻后，37℃保溫5 min，用分光光度計(jì)比色，于500 nm波長(zhǎng)處以空白管調(diào)零，讀出各管吸光度。 【計(jì)算】

血清TC (mmol/L)＝

測(cè)定管吸光度

×膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液濃度

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度

【參考范圍】 血清參考值：3.0～5.20 mmol/L；危險(xiǎn)閾值：5.20～6.20 mmol/L；高膽固醇血癥：≥6.20 mmol/L。 【臨床意義】

1．TC增高

常見(jiàn)于動(dòng)脈粥樣硬化、原發(fā)性高脂血癥(如家族性高膽固醇血癥、家

族性ApoB缺陷癥、多源性高膽固醇血癥、混合性高脂蛋白血癥等)、糖尿病、腎病綜合征、總膽管阻塞、甲狀腺功能減退、肥大性骨關(guān)節(jié)炎、老年性白內(nèi)障和牛皮癬。

2．TC降低

常見(jiàn)于低脂蛋白血癥、貧血、敗血癥、甲狀腺功能亢進(jìn)、肝臟疾病、

嚴(yán)重感染、營(yíng)養(yǎng)不良、腸道吸收不良和藥物治療過(guò)程中的溶血性黃疸及慢性消耗性疾病，如癌癥晚期等。

1．試劑中酶的質(zhì)量影響測(cè)定結(jié)果。

2．若需檢測(cè)游離膽固醇濃度，將酶試劑成分中去掉膽固醇酯酶即可。 3．檢測(cè)標(biāo)本可為血清或者血漿(以肝素或EDTAK2抗凝)。 【評(píng)價(jià)】 本方法線性范圍為≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。

本方法特異性好和靈敏度高，既可用于手工操作，也可自動(dòng)化分析；既可作終點(diǎn)法檢測(cè)，也可作速率法檢測(cè)。

在終點(diǎn)法中血紅蛋白高于2 g/L時(shí)引起正干擾；膽紅素高于0.1 g/L時(shí)有明顯負(fù)干擾；血中維生素C與甲基多巴濃度高于治療水平時(shí)，會(huì)使結(jié)果降低。但是在速率法中上述干擾物質(zhì)影響較小。高TG血癥對(duì)本法無(wú)明顯影響。

檢測(cè)TC的血清(漿)標(biāo)本密閉保存時(shí)，在4℃可穩(wěn)定1周，－20℃可穩(wěn)定半年以上。

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